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Protocole détaillé d'une culture de rotifère - Planktovie

Protocole de culture du rotifère


Bien débuter sa culture de rotifères

Ce protocole présente et décrit les points à considérer pour la culture de rotifères destinés au nourrissage des larves de poisson zèbre.

Configuration typique

• La cuve de culture doit être remplie avec 50 L d’eau de culture à 15 ppt de salinité.

• La culture est d’abord inoculée avec des rotifères qui peuvent être achetés auprès d’un fournisseur commercial (Planktovie en fournit par exemple dans des sacs en plastique ou des flacons «respirants»). Une population de 5 à 10 millions de rotifères convient à une culture de 100 L. À la réception, chaque sac de rotifères doit être équilibré en température (car les rotifères sont expédiés réfrigérés) en les introduisant dans l’eau de culture pendant 20 à 30 minutes.

• Après l‘équilibrage de la température, les sacs sont ouverts et le contenu est transféré dans la cuve de culture.

L’aération est lancée et le nourrissage commence.

• Les rotifères nécessiteront environ une journée pour se remettre complètement du refroidissement auquel ils ont été soumis lors de l’expédition. Au départ, nourrir les rotifères avec des concentrés d’algues, par exemple, 0,5 mL de RotiGrow Nanno par million de rotifères toutes les 6-8 heures, ou assez pour donner une teinte verte distincte à l’eau de culture.

Rq: le nourrissage du rotifère devrait considérablement réduire la teinte verte après quelques heures. S’il n’y a pas de réduction de la couleur verte, examinez les rotifères pour confirmer qu’ils nagent activement et qu’il y a une coloration verte dans leurs entrailles et ne continuez à nourrir que lorsque la teinte verte de l’eau est réduite.

• Si le nourrissage s’est rétabli, après 24 heures, le volume d’eau dans le vase de culture peut être augmenté à 100 L et le nourrissage peut continuer. Du ClorAm-X devrait être ajouté à 0,11 g pour 1 mL de RotiGrow Nanno utilisé. Pas besoin d’ajouter de ClorAm-X si les rotifères sont nourris avec du RGcomplete (car il intègre déjà du ClorAm-X dans la composition)

• 48 heures après l’inoculation, l’opération de routine de la culture peut commencer.

• La culture est nourrie automatiquement avec une pompe péristaltique contrôlée par minuterie qui puise d’un récipient de concentré d’algues maintenu à 4°C. La minuterie doit être configurée pour fournir un nourrissage au moins une fois par heure. 2-4 fois / heure est encore mieux. Cette configuration doit être vérifiée tous les jours pour s’assurer que l’approvisionnement en concentré d’algues n’est pas épuisé et que les lignes de nourrissage ne sont pas bouchées.

• Pour déterminer le taux de dosage du nourrissage, il ne suffit pas de savoir combien de rotifères sont dans la culture, car c’est le taux de récolte qui détermine la production requise, et donc la quantité de nourrissage nécessaire.

Voici quelques exemples de nourrissage (en mL/jour) requis par million de rotifères récoltés:

RotiGrow Nanno
3.1 mL/jour

RotiGrow Plus
3.8 mL/jour

RGcomplete
11 mL/jour

Opération de routine

• Environ 25% à 50% de la culture devrait être récolté chaque jour. L’aération doit être maintenue dans la cuve de culture lors de la collecte pour s’assurer que les rotifères sont uniformément répartis dans la colonne d’eau.

• Le robinet de vidange est ouvert et le volume souhaité de culture peut traverser le tamis de récolte (60 à 40µm).

• Les rotifères collectés peuvent être immédiatement transférés dans 1-4 L d’eau de salinité pré-mélangée de 3 à 5 ppt par rinçage doux, distribués dans des bouteilles pressables. Allouez 10-20 minutes pour l’acclimatation osmotique. Ce sous-stock de rotifères est ensuite utilisé pour l’alimentation des larves.

• Une fois que les rotifères sont récoltés à partir du récipient, le filtre de fibres doit être retiré et rincé vigoureusement avec un jet d’eau douce jusqu’à ce que l’eau de rinçage soit propre. Toute la surface intérieure de la cuve devrait ensuite être balayée avec une brosse dédiée.

• La cuve de culture devrait ensuite être réapprovisionnée avec de nouvelles eaux de culture. Une fois propre, le filtre de fibres est ensuite remis en suspension à l’intérieur de la cuve pour que le fonctionnement normal puisse reprendre.

• La densité de rotifères doit être vérifiée tous les jours. Une façon simple de le faire est de collecter un échantillon de 100 L directement à partir de la cuve de culture et de l’examiner sous un microscope de dissection. Les rotifères de cet échantillon peuvent être facilement comptés et leur santé évaluée. Une chambre de comptage avec grille (type Sedgewick-Rafter) rend les densités élevées plus faciles à compter.

Conseils pour une culture réussie

• Il est également important de savoir si les rotifères dans l’échantillon portent des œufs. Les taux d’œufs (nombre d’œufs / compte de rotifères) varient généralement de 0,25 à 0,5, mais un taux d’œufs de 0,25 dans une culture de grande récolte est suffisant pour doubler la population par jour (car un rotifère peut pondre plus d’un œuf par jour). Un faible taux d’œufs ou un nombre inhabituel d’œufs détachés indique des conditions défavorables.

• À moins que les densités de rotifères ne soient extrêmement élevées (> 2000mL-1), les cultures tolèrent généralement sans problème un jour ou deux de négligence. Néanmoins, le système de culture doit être vérifié quotidiennement pour s’assurer qu’il fonctionne correctement (c’est-à-dire s’assurer que le nourrissage en algues est adéquat, que l’aération est toujours active, etc.).

• Des cultures de sauvegarde des rotifères devraient être conservées en cas d’urgence. Une fois toutes les 1-2 semaines, une petite portion (par exemple, 3 à 5 ml de rotifères concentrés récoltés ou autre quantité appropriée) doit être recueillie et placée dans un flacon propre de 500 ml contenant 15 ppt d’eau et quelques gouttes de concentré d’algues. Les rotifères réfrigérés ralentissent leur métabolisme et peuvent être conservés à 4°C pendant 2 semaines maximum. Ils peuvent être utilisés comme sauvegarde pour recommencer ou renforcer la culture en cas de besoin.

• Avec des pâtes d’algues très concentrées telles que le RG complete, à l’usage, les tubulures qui servent à alimenter la culture de rotifères tendent à s’encrasser et les algues finissent par boucher la tubulure. Ceci perturbe le débit de pompage et donc la quantité d’algues distribuée par la pompe péristaltique à chaque action de la pompe. Ainsi la quantité d’algue distribuée à la culture n’est plus fidèle à la quantité demandée à la pompe. Pour limiter ce type de problème et éviter des erreurs dans l’alimentation en algues des rotifères, nous recommandons de diluer la solution d’algues utilisée. Pour ce faire, utilisez de l’eau à 30ppt de salinité et diluez le RG complete 10 fois. Cela permet aussi de distribuer plus précisément les algues pour la culture de rotifères tout au long de la journée (24/24h). On rappel que même diluée, la solution d’algues doit être conservée à l’abri de la lumière et à 4°C, donc idéalement dans un réfrigérateur.

• Contrôlez le débit de votre pompe péristaltique ainsi que l’état de propreté de la tubulure utilisée aussi souvent que possible. Effectuez pour cela un étalonnage de la pompe et changez la tubulure régulièrement. »

Sources et références

• C. Lawrence et al., Zebrafish, vol 9 (3), 2012. Méthodes pour la culture des rotifères d’eau de mer (Brachionus plicatilis) pour l’élevage des larves de poisson zèbre.

• Organisation des Nations Unies pour l’alimentation et l’agriculture: http://www.fao.org/docrep/003/w3732E/w3732e00.htm#Contents

http://reedmariculture.com/index.php

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